Судебная медицина: конспект лекций.

ЛЕКЦИЯ № 15. Судебно-медицинская экспертиза вещественных доказательств биологического происхождения.

1. Предварительные пробы на наличие крови.

Когда отыскание кровяных следов сопряжено с особыми трудностями, могут быть применены предварительные пробы на кровь. Наиболее распространены три реакции: с 3 %-ным раствором перекиси водорода, бензидиновая проба в модификации В. И. Воскобойникова и реакция с люминолом.

Реакции очень чувствительны, но не специфичны и не постоянны: положительный результат может быть получен не только с кровью и кровь может дать иногда отрицательный результат. Положительный результат позволяет выбрать предметы (их части) для направления на экспертизу. Отрицательным результатом следует пренебрегать, если обстоятельства происшествия позволяют считать исследование конкретных предметов перспективным.

Предварительные пробы применяются в случаях, когда видимых следов крови обнаружить не удается и возникает вопрос: что следует изымать для исследования?

Пробы просты по выполнению. На край пятна наносят каплю 3 %-ного раствора перекиси водорода. В присутствии крови образуется белая мелкая пена.

При пробе с бензидином изготовляют реактив, состоящий из механической порошкообразной смеси: перекиси бария (5 частей), основного бензидина (2 части), лимонной кислоты (10 частей). Перед применением небольшое количество порошка (на кончике ножа) растворяют в воде (1/4 стакана). Раствором смачивают небольшой тампон из ваты и им прикасаются к краю следа. В присутствии крови тампон приобретает ярко-синее окрашивание.

В затемненном помещении при необходимости осмотра сравнительно большой площади или выявления следов крови после ее удаления применяется реакция с люминолом. Каплю реактива наносят на край следа или опрыскивают им помещение. В присутствии крови возникает яркая голубоватая вспышка – люминесценция, длящаяся почти минуту.

Установление наличия крови.

Определение присутствия крови основано на обнаружении красящего вещества крови – гемоглобина и его производных. Наиболее распространенными методами исследования являются метод тонкослойной хроматографии, микролюминесценции, спектральный и микроспектральный анализы. В основе их лежит способность гемоглобина и его производных поглощать волны света определенной длины.

Для каждого производного гемоглобина характер этих спектров специфичен по количеству, расположению, ширине и интенсивности полос поглощения. Для установления наличия крови практически пользуются спектрами производных гемоглобина – гемохромогена и гематопорфирина, полученными после обработки части следа соответствующими реактивами. Для такого исследования достаточно ничтожно малое количество объекта, реакция очень чувствительна, а ее результаты определяются с помощью спектральных насадок СПО-1, АУ-16, спектроскопа прямого видения и микроскопа. Микроспектральное исследование позволяет установить наличие крови даже после попыток ее удаления (стирки) в следах большой давности. Обнаружение спектра гемохромогена или гематопорфирина удостоверяет присутствие крови.

Метод тонкослойной хроматографии является основным и позволяет получить положительный результат даже в сложных случаях. Данный метод основан на том, что растворитель при прохождении через вытяжки, нанесенные на силуфолевые пластины, приводит к разложению крови на компоненты, после чего последние подвергают обработке спиртовым раствором бензидина и 3 %-ным раствором перекиси водорода.

Метод микролюминесценции основан на том, что производные гемоглобина, в частности гематопорфирин, обладают яркой флюоресценцией в УФЛ. Метод информативен при исследовании старых и замытых следов крови.

Определение вида крови.

Проведение такого исследования, с одной стороны, диктуется обстоятельствами происшествия, когда в процессе расследования возникают версии о происхождении крови на предметах не только от человека, но и от птиц, млекопитающих, рыб, а с другой – определяется дальнейшим исследованием групповой принадлежности крови в следах, которое нельзя проводить без установления вида крови.

Для определения вида крови чаще всего пользуются реакцией белковой преципитации (Чистовича-Уленгута). В реакции преципитации участвуют два компонента: вытяжка из пятна крови и иммунная сыворотка, преципитирующая определенный вид белка. В основе данной реакции лежит взаимодействие белка из пятна крови с соответствующей сывороткой, при положительном результате реакции образуется осадок – преципитат. Выпускаются сыворотки, осаждающие белок человека, рогатого скота (крупного, мелкого), лошади, свиньи, кошки, собаки, птицы. Следует иметь в виду, что могут быть приготовлены сыворотки, осаждающие белки и других животных.

Кроме основного опыта с вытяжкой из пятна крови ставят контрольные опыты, в том числе и с вытяжками из предмета вне пятен крови, поскольку белок человека может присутствовать на предметах (чаще всего на одежде) и не только с кровью (например, выделения из носа, пот, моча и т. п.). В подобных случаях невозможно определить вид крови. Если положительный результат с сывороткой на белок человека не был получен, эксперт обязан ставить реакцию преципитации с сыворотками, изготовленными на белки различного вида животных, до получения положительного результата.

В настоящее время для определения видовой принадлежности крови используют реакции преципитации в агаровом геле, встречного иммуноэлектрофореза, иммунофлюоресценции.

Реакция преципитации в геле была предложена О. Оuсhtеrlоnу (1949). Ее принцип состоит в следующем: в агаре в две лунки помещают антиген и антитело, они диффундируют друг в друга и в месте контакта образуется полоса преципитации.

Встречный иммуноэлектрофорез (электропреципитация) впервые был предложен Вussаrdоm (1959). Сущность реакции заключается в следующем: глобулиновые фракции сывороток, содержащие антитела, направляются от «+» к «-», а антигены – от «-» к «+». Таким образом, двигаясь навстречу друг другу, они образуют полосу преципитации. Данная реакция может быть проведена как в агаровом геле, так и на пленках ацетатцеллюлозы.

РИФ-реакция иммунофлюоресценции была предложена в 1942 г. Сооns и соавторами. Она основана на люминесценции антител, меченных различными флюорохромами, при этом антитела вступают в контакт с антигенами на поверхности объектов исследования. Используется непрямая реакция иммунофлюоресценции, состоящая из двух этапов:

1) контакт антигена с нефлюоресцирующей сывороткой;

2) обработка объекта исследования люминесцирующей сывороткой.

После установления принадлежности крови человеку определяют ее группу.

Определение группы крови.

При расследовании таких тяжких преступлений, как убийство, изнасилование, совершенных при отсутствии свидетелей, выяснение возможной принадлежности крови потерпевшему, подозреваемому приобретает особо важное значение.

Определять групповую принадлежность можно в следах крови на предметах, в тканях расчлененных частей трупов, в жидкой крови, изъятой у потерпевших или подозреваемых в качестве образцов. При исследовании трупа с повреждениями, сопровождающимися наружным кровотечением, определение группы крови, изъятой из трупа, обязательно. В дальнейшем могут быть обнаружены следы крови на предметах, у лиц, подозреваемых в совершении преступления, на транспортных средствах, месте происшествия. Групповая принадлежность этих следов должна сопоставляться с групповой принадлежностью образцов крови погибшего.

Определение групповой принадлежности крови основано на обнаружении особых веществ, имеющихся на поверхности эритроцитов (антигены) и в сыворотке крови (агглютинины). В сыворотке крови здорового человека, как правило, не встречаются агглютинины, вступающие в реакцию с антигенами, находящимися в эритроцитах данного лица. На этом основано разделение всех людей на группы. Групповые признаки развиваются еще в утробном периоде жизни. Впоследствии данные признаки качественно не меняются. В сухой крови и ее следах агглютинины могут сохраняться несколько лет. Антигены сохраняются значительно дольше.

Кроме эритроцитов, такие же антигены содержатся в органах и тканях человека, его выделениях, что дает возможность определять их групповую принадлежность. Каждый человек обладает характерным для него индивидуальным набором антигенов и сывороточных белков.

Групповая принадлежность следов крови практически определяется в пределах эритроцитарной изосерологической системы АВО, при необходимости по системам Р, Льюис, МNSs, Резус, глобулиновой системы сыворотки. В жидкой крови возможно более широкое определение. Имеется возможность выявить или исключить в пятнах жидкой крови значительно большее количество системы как эритроцитов, так и сыворотки, системы ферментов и др.

По системе АВО кровь людей разделяется на четыре группы: О(I), А(II), В(Ш) и АВ(IV). При определении групповой принадлежности образцов жидкой крови исследуются отдельно эритроциты и сыворотка. При исследовании пятен ставится контрольная реакция материалом предмета – контроль предмета-носителя.

Трудности определения групповой принадлежности крови в пятнах связаны главным образом с влиянием самого материала, предмета, на котором обнаружены следы крови, а также с небольшим количеством крови в пятнах, первоначальной силой антигенов и агглютининов.

Определение групповой принадлежности крови позволяет исключить ее принадлежность определенному лицу (потерпевшему или подозреваемому) или указать, что такое исключение нельзя сделать.

Групповая принадлежность жидкой крови определяется в связи с разрешением вопросов о спорном отцовстве, замене детей, краже ребенка и, как исключение, о спорном материнстве. Исследование основано на закономерностях передачи потомкам по наследству групповых признаков.

Дифференцирование крови взрослого человека и плода.

Кровь плода, новорожденного ребенка и ребенка в возрасте примерно до 1 года отличается от крови человека старше данного возраста. Отличия заключаются в строении некоторых определенных белков, в частности R-фетопротеина. Дифференцировку белков, имеющихся в крови взрослого человека, от соответствующих белков младенца производят с использованием методов электрофореза. Также возможно выявить различия в активности некоторых ферментов с применением биохимических методов. Вышеуказанные методики широко не используются в повседневной практике ввиду сложности их выполнения, а также необходимости применения дорогостоящих реактивов и оборудования.

Кроме того, гемоглобин взрослых менее устойчив к щелочной денатурации, чем гемоглобин плода.

В 1958 г. немецкими исследователями для клинических целей был предложен цитологический метод выявления фетального гемоглобина.

В 1984 г. Н. В. Белихиной была предложена методика выявления FеНb для судебно-медицинского исследования вещественных доказательств. Принципиальную основу метода составляет то, что FеНb более устойчив к воздействию НСl (соляной кислоты) и пепсина по сравнению с НЬ взрослого человека.

Возможности регионарного происхождения крови.

В судебно-медицинской практике используются методы, направленные на выявление примесей в следах крови. Характер этих примесей обусловлен местом кровотечения. Клетки и ткани какого-либо органа имеют свое индивидуальное строение. Даже однотипные ткани в различных органах могут иметь определенные различия. Так, например, при носовом кровотечении возможно определение примеси, состоящей из слизи и клеток ткани эпителия полости носа, при кровотечении из матки находят клетки соответствующего эпителия и характерную слизь, при кровотечении из прямой кишки в качестве примеси возможно обнаружение кала.

В настоящее время разрабатываются новые методы, основанные на выявлении в следах крови примесей в виде ферментов и на измерении ферментативной активности.

Определение давности образования пятен крови.

Содержащийся в эритроцитах гемоглобин постепенно под воздействием факторов внешней среды изменяется. Эти изменения называют «старением». Со временем гемоглобин в несколько этапов превращается из оксигемоглобина в гематопорфирин. Каждая из форм гемоглобина имеет собственные спектральные характеристики. Спектрофотометрическим методом устанавливается этап превращения гемоглобина. На основе результатов применения данного метода можно судить о давности образования крови в пятне на вещественных доказательствах. Однако на процесс «старения» гемоглобина оказывает влияние в каждом конкретном случае какой-то индивидуальный комплекс факторов. Среди них можно указать влажность, солнечный свет, температуру, свойства материала предмета, на котором располагается след крови, а также исходное состояние крови и т. д. Данные обстоятельства делают результат определения давности образования пятен крови весьма приблизительным.

Вместе с тем в настоящее время, используя биохимические методы, возможно путем определения ферментативной активности крови ответить на вопрос о давности следов крови. Некоторые ферменты крови сохраняют свою активность в течение 80– 100 дней.

Установление количества излившейся жидкой крови по ее следам.

В некоторых случаях в связи с расследованием дел, связанных с причинением повреждений, сопровождающихся наружным кровотечением, возникает необходимость определения объема кровотечения по следам крови. Известно, что при высушивании 1000 мл жидкой крови получается примерно 211 г сухого остатка. Исходя из этих данных возможно определить по количеству сухой крови в обнаруженных следах первоначальный объем излившейся жидкой крови. При этом следует учитывать приблизительный характер данных вычислений, обусловленный несколькими обстоятельствами. Дело в том, что степень высыхания крови и получение сухого остатка в каждом конкретном случае индивидуальны. И вместе с тем не представляется возможным точно измерить массу сухой крови в ее следах.

Определение состояния беременности по пятнам крови.

Имеются сведения, что вскоре после начала беременности, начиная примерно с 8—10-го ее дня, в крови женщины появляется соответствующий гормон. Он обладает хорошей устойчивостью во внешней среде. Вследствие чего обнаружение его в следах крови не представляет затруднений и служит доказательством происхождения крови от беременной женщины.

Также в крови беременных женщин имеется фермент – окситоциназа. После родов он постепенно исчезает в течение первого месяца. Данный фермент также хорошо сохраняется в следах крови. Его можно обнаружить даже спустя 2–3 месяца после образования пятна крови. Выявление наличия данного фермента в следах крови также свидетельствует о происхождении крови от беременной или недавно родившей женщины.

Определение происхождения крови от живого человека или от трупа.

Данный вопрос крайне редко возникает в судебно-медицинской практике. Принцип применяемой для этого методики заключается в следующем. Через некоторое время после смерти, спустя примерно 1–2 ч, в кровь трупа начинают проникать ферменты, которые при жизни находились исключительно в тканях. Следовательно, постепенно кровь в трупе приобретает другие свойства. Решение данного вопроса основано на выявлении в следах крови вышеуказанных ферментов. Вместе с тем следует отметить, что поскольку кровь недавно умершего человека практически ничем не отличается от крови живого человека, данная методика не работает в подобной ситуации. Поэтому сказать, что пятно образовалось, пока человек был еще жив, или сразу после наступления смерти, не представляется возможным.

Установление или исключение происхождения крови от конкретного индивидуума.

Вопрос о происхождении крови от конкретного человека имеет большое значение в делах о раскрытии преступлений против личности. Экспертное заключение о происхождении крови на орудии травмы, а также теле или одежде жертвы от подозреваемого или о происхождении крови на каких-либо вещественных доказательствах от потерпевшего является одним из важных доказательств.

Разрешение данного вопроса осуществляется двумя способами. Первый заключается в сравнении групповой принадлежности крови с вещественных доказательств и крови от конкретного лица. В крови человека в разных ее компонентах находятся белки-антигены, они обусловлены индивидуальными свойствами ДНК, которая получена каждым человеком по наследству от обоих родителей. Эти антигены у разных людей очень похожи и представляют собой варианты строения одного и того же белка, однако имеются некоторые отличия в строении данных белков. Различающиеся антигены одного типа называют изоантигенами. Антигены одного типа с вышеуказанными различиями составляют систему. Например, по системе АВО людей можно поделить на четыре группы крови, различия которых предопределены наличием или отсутствием двух изоантигенов. Существуют также и другие системы с различным количеством групп в них. Например, в системе МNSs существует девять групп. У какого-либо конкретного человека можно определить группу крови по многим системам. Например, по системе АВО кровь индивида может относиться к первой группе, по системе МNSs – к восьмой и т. д. Вариантов групп крови, например по десяти системам, можно насчитать более 300 тысяч. Следовательно, конкретный вариант групп крови по десяти системам встречается у одного из 300 тысяч людей. Количество вариантов групп крови по другим системам или по другому количеству систем будет в той или иной мере отличаться. Тем не менее вышеизложенное достаточно наглядно иллюстрирует возможность применения данного метода, например с целью установления конкретного виновника из конечного и относительно небольшого количества подозреваемых.

Второй подход к установлению происхождения крови от конкретного индивида осуществляется путем применения относительного молодого молекулярно-генетического метода. Данным методом выявляются индивидуальные особенности строения дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК). Исследованию могут быть подвергнуты любые части тела, кровь и даже выделения. Основным условием для данного метода является наличие в исследуемом материале ДНК. Метод имеет очень высокую достоверность результатов, позволяющую не в вероятностной, как это бывает в случае применения большинства судебно-медицинских методик, а в практически категоричной форме судить о биологическом тождестве или различии исследуемых объектов. Ограничения в применении данного метода связаны с его большой трудоемкостью, наукоемкостью, а также с относительно большой стоимостью.